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1.CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(1)優(yōu)點CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞,既可以貼壁生長。也可以懸浮生長。目前常用的CHO細(xì)胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來,為降低生...
4-28
雜交膜上有很多非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點,為防止這些位點與抗體結(jié)合引起非特異的染色和背景,一般用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點來降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點而不替換...
4-27
原理蛋白質(zhì)分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及側(cè)鏈的游離基團而成為帶電顆粒,并可在電場內(nèi)移動,其移動方向取決于蛋白質(zhì)分子所帶靜電荷。不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值,攜帶的靜電荷不盡...
4-26
當(dāng)免疫組化染色沒有出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果時,應(yīng)系統(tǒng)地查找原因,而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標(biāo)本無染色①確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入...
4-25
PAg復(fù)合物制備方法簡便,作為第二抗體,無種屬特異性,可以免去不同種屬動物要制備不同的特異性免疫球蛋白。PAg復(fù)合物與包埋劑和細(xì)胞成分都極少發(fā)生非特異性的交互作用,蛋白A和金粒間非共價的結(jié)合特性既不影...
4-23
以病毒為載體將外源基因?qū)肽切╇y以用質(zhì)粒-轉(zhuǎn)染試劑法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞或組織,不僅效率高,而且有可能避免由于轉(zhuǎn)染試劑的毒性造成的假象,因此病毒轉(zhuǎn)染法在基因功能研究中正變得越來越重要了。在制備具有感染能力的病毒...
4-22
福爾馬林固定時,組織中的許多氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成了醛鍵,使得不少抗原決定簇被封閉。同時,由于甲醛的聚合作用,使蛋白質(zhì)分子間相互交聯(lián)形成大分子網(wǎng)絡(luò),也導(dǎo)致了抗原決定簇被掩蓋,這就使得相當(dāng)部分的...